常规固相萃取小柱
在常规固相萃取操作中，SPE小柱是非常重要的。但SPE小柱生产企业天津彪仕奇要提醒大家，SPE小柱的种类有很多，在具体的实验工作中，需要根据分析对象、检测手段以及实验室条件来合理选择合适填料、合理规格的SPE小柱。另外，要考虑固相萃取柱对分析对象的萃取能力、样品溶液的体积、洗脱后溶液的zui终体积、及样品溶液中被测物及干扰物的总量。一般被柱中吸附剂吸附的被测物及干扰物的总质量不应超过吸附物总质量的5%。洗脱剂的体积一般应是萃取柱柱床体积的2-5倍。
1、选择SPE小柱或滤膜
首先应根据待测物的理化性质和样品基质, 选择对待测物有较强保留能力的固定相。若待测物带负电荷, 可用阴离子交换填料, 反之则用阳离子交换填料。若为中性待测物, 可用反相填料萃取。天津SPE小柱公司彪仕奇提醒大家，SPE 小柱或滤膜的大小与规格应视样品中待测物的浓度大小而定。对于浓度较低的体内样品, 一般应选用尽量少的固定相填料萃取较大体积的样品。
2、活化
萃取前先用充满小柱的溶剂冲洗小柱或用5～ 10ml 溶剂冲洗滤膜。天津彪仕奇SPE仪器公司提醒大家一般可以先用甲醇等水溶性有机溶剂冲洗填料, 因为甲醇能润湿吸附剂表面, 并渗透到非极性的硅胶键合相中, 使硅胶更容易被水润湿, 之后再加入水或缓冲液冲洗。加样前, 应使SPE 填料保持湿润, 如果填料干燥会降低样品保固相萃取技术方法固相萃取技术方法留值; 而各小柱的干燥程度不一, 则会影响回收率的重现性。
3、上样
一般可采取以下措施:
(1) 用0.1mol/L酸或碱调节,使pH<3或ph>9,离心取上层液萃??；
(2) 用甲醇、乙腈等沉淀蛋白质后取上清液,以水或缓冲液稀释后萃??；
(3) 用酸或无机盐沉淀蛋白质后取上清液,调节pH 值后萃??；
(4) 超声15min后加入水、缓冲液,取上清液萃取。
4、淋洗
反相SPE的清洗溶剂多为水或缓冲液,可在清洗液中加入少量有机溶剂、无机盐或调节pH值。天津SPE小柱公司彪仕奇提醒大家，加入小柱的清洗液应不超过一个小柱的容积,而SPE滤膜为5～10ml。
5、洗脱待测物
天津彪仕奇SPE仪器公司提醒大家，应选用5～10ml离子强度较弱但能洗下待测物的洗脱溶剂。若需较高灵敏度,则可先将洗脱液挥干后,再用流动相重组残留物后进样。体内样品洗脱后多含有水,可选用冷冻干燥法。保留能力较弱的SPE 填料可用小体积、较弱的洗脱液洗下待测物,再用极性较强的HPLC 分析柱如C18柱分析洗脱物。若待测物可电离,可调节pH 值,抑制样品离子化,以增强待测物在反相SPE 填料中的保留,洗脱时调节pH值使其离子化并用较弱的溶剂洗脱,收集洗脱液后再调节pH值使其在HPLC分析中达到zui佳分离效果。在洗脱过程中应减慢流速,用两次小体积洗脱代替一次大体积洗脱, 回收率更高。
