天津色谱级异丙醇彪仕奇色谱法按外标法或内标法以峰高或峰面积进行定量。
内标法用于GC和HPLC减小测定误差,曾经起到很好的作用,特别是在GC中,进样量小,内标法能显著提高定量精度,随着现代分析仪器的发展,原手动进样已被定量环或自动化程度高的进样器所取代,内标法的应用受到挑战,尤其在HPLC中,由于进样量大,外标法已具有很好的进样精度,加入内标,有时反而对分析不利,有研究者曾随机选取药典中八个内标法测定含量的药品进行试验,结果表明,内标法均不能提高分析精度,实际上,内标法使分析误差与经常校准的外标法相比增加了√2倍,说明测定两个峰比测定一个峰引入的误差要大。一般情况下,如下情况适合于使用内标法:复杂的样品制备过程,如多次提取;低浓度的样品(灵敏度是确定的),如药代动力学的研究;在样品分析中预计是很宽的浓度范围,如药代动力学研究。外标法多用于原料验收、成品质控、稳定性和TLC法,内标法多生物体液和GC法。需要注意的是,在外标法中,保持供试品浓度与对照品浓度相近可以改善方法的准确性。
峰高定量仅在峰高随样品量呈线性变化时使用,当峰形不正或色谱柱超载时,峰高法会出现较大误差,由于峰高测量受相邻重叠峰的干扰较小,故比峰面积定量更为准确,如BP中庆大霉素C组份检测明确要求峰高定量。峰面积定量的好处是其精度受仪器参数变化的影响较小,对不是高斯分布的峰形也能较好定量,但其准确度受相邻峰重叠的影响。一般情况下,为得到较好的精确度,宜用峰面积定量;为最大限度地排除其它组份的干扰,则多用峰高定量。痕量分析中多用峰高法定量。
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